10X πρωτόκολλο ή συνταγή απομόνωσης ηλεκτροφόρησης TBE

click fraud protection

TBE και ΤΑΕ χρησιμοποιούνται ως ρυθμιστικά στη μοριακή βιολογία, κυρίως για ηλεκτροφόρηση νουκλεϊκών οξέων. Τα ρυθμιστικά διαλύματα Tris χρησιμοποιούνται κάτω από ελαφρώς βασικές συνθήκες pH, όπως για την ηλεκτροφόρηση DNA, επειδή αυτό διατηρεί το DNA διαλυτό στο διάλυμα και αποπρωτονιωμένο έτσι ώστε να προσελκύεται από το θετικό ηλεκτρόδιο και θα μεταναστεύσει μέσω του α γέλη. EDTA είναι ένα συστατικό της λύσης επειδή αυτό είναι κοινό χηλικό παράγοντα προστατεύει τα νουκλεϊκά οξέα από την αποικοδόμηση με ένζυμα. Το ΕϋΤΑ χηλύνει δισθενή κατιόντα που είναι συμπαράγοντες για νουκλεάσες που μπορεί να μολύνουν το δείγμα. Ωστόσο, επειδή το κατιόν μαγνησίου είναι συμπαράγοντας για ϋΝΑ πολυμεράση και ένζυμα περιορισμού, η συγκέντρωση του ΕϋΤΑ διατηρείται σκοπίμως χαμηλή (περίπου 1 mM συγκέντρωση).

Δεν χρειάζεται να αποστειρώσετε τη λύση. Παρόλο που μπορεί να συμβεί βροχόπτωση μετά από ένα χρονικό διάστημα, το αποθεματικό διάλυμα εξακολουθεί να χρησιμοποιείται. Μπορείτε να ρυθμίσετε το ρΗ χρησιμοποιώντας ένα μετρητή pH και προσθέτοντας στάγδην συμπυκνωμένο

instagram viewer
υδροχλωρικό οξύ (HCl). Είναι καλό να αποθηκεύσετε το ρυθμιστικό διάλυμα TBE σε θερμοκρασία δωματίου, αν και ίσως θέλετε να φιλτράρετε το διάλυμα αποθέματος μέσω φίλτρου 0,22 μικρομέτρων για να αφαιρέσετε σωματίδια που θα προωθούσαν την καθίζηση.

Χρησιμοποιώντας ένα απόθεμα διάλυμα 5Χ ή 10Χ τυχαία θα σας δώσει ανεπαρκή αποτελέσματα επειδή θα δημιουργηθεί πολύ θερμότητα. Εκτός από την ανεπαρκή ανάλυση, το δείγμα μπορεί να καταστραφεί.

Παρόλο που τα ΤΒΕ και τα ΤΑΕ είναι κοινά αποθέματα ηλεκτροφόρησης, υπάρχουν άλλες επιλογές για αγώγιμα διαλύματα χαμηλής γραμμομοριακότητας, συμπεριλαμβανομένου ρυθμιστικού διαλύματος βορικού λιθίου και ρυθμιστικού διαλύματος βορικού νατρίου. Το πρόβλημα με τα ΤΒΕ και ΤΑΕ είναι ότι τα ρυθμιστικά διαλύματα με βάση το Tris περιορίζουν το ηλεκτρικό πεδίο που μπορεί να χρησιμοποιηθεί στην ηλεκτροφόρηση επειδή υπερβολικά μεγάλη φόρτιση προκαλεί μια διαφυγόντα θερμοκρασία.

instagram story viewer