Αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών ή διάλυμα PBS

PBS ή ρυθμισμένο με φωσφορικά αλατούχο είναι ένα ρυθμιστικό διάλυμα Αυτό είναι ιδιαίτερα πολύτιμο επειδή μιμείται τη συγκέντρωση ιόντων, την οσμωτικότητα και το ρΗ των υγρών του ανθρώπινου σώματος. Με άλλα λόγια, είναι ισοτονικό για τα ανθρώπινα διαλύματα, επομένως είναι λιγότερο πιθανό να προκαλέσει βλάβη στα κύτταρα, τοξικότητα ή ανεπιθύμητη καταβύθιση σε βιολογική, ιατρική ή βιοχημική έρευνα.

Υπάρχουν πολλές συνταγές για την προετοιμασία της λύσης PBS. Το βασικό διάλυμα περιέχει νερό, όξινο φωσφορικό νάτριο και χλωριούχο νάτριο. Μερικά παρασκευάσματα περιέχουν χλωριούχο κάλιο και διένυδρο φωσφορικό κάλιο. Το EDTA μπορεί επίσης να προστεθεί στο κυτταρικό παρασκεύασμα για να αποφευχθεί η συσσώρευση.

Το αλατούχο διάλυμα με φωσφορικά δεν είναι ιδανικό για χρήση σε λύσεις που περιέχουν δισθενή κατιόντα (Φε²⁺, Zn²⁺επειδή μπορεί να συμβεί βροχόπτωση. Ωστόσο, ορισμένα διαλύματα PBS περιέχουν ασβέστιο ή μαγνήσιο. Επίσης, λάβετε υπόψη ότι το φωσφορικό μπορεί να αναστέλλει τις ενζυματικές αντιδράσεις. Να γνωρίζετε ιδιαίτερα αυτό το πιθανό μειονέκτημα όταν εργάζεστε με DNA. Αν και το PBS είναι εξαιρετικό για τη φυσιολογική επιστήμη, να γνωρίζετε ότι το φωσφορικό σε ένα PBS ρυθμισμένο δείγμα μπορεί να καθιζάνει εάν το δείγμα αναμιγνύεται με αιθανόλη.

Μια τυπική χημική σύνθεση 1X PBS έχει τελική συγκέντρωση 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl και 2,7 mM KCl. Εδώ είναι η τελική συγκέντρωση αντιδραστηρίων στο διάλυμα:

Ανάλογα με το σκοπό σας, μπορείτε να προετοιμάσετε 1X, 5X ή 10X PBS. Πολλοί άνθρωποι απλώς αγοράζουν PBS ρυθμιστικά δισκία, διαλύονται σε απεσταγμένο νερό και προσαρμόζουν το pH ανάλογα με τις ανάγκες με υδροχλωρικό οξύ ή υδροξείδιο του νατρίου. Ωστόσο, είναι εύκολο να φτιάξετε τη λύση από το μηδέν. Ακολουθούν συνταγές για 1Χ και 10Χ φυσιολογικό ορό ρυθμισμένο με φωσφορικά:

1. Διαλύστε τα άλατα του αντιδραστηρίου σε 800 ml απεσταγμένου νερού.
2. Ρυθμίστε το pH στο επιθυμητό επίπεδο με υδροχλωρικό οξύ. Συνήθως αυτό είναι 7,4 ή 7,2. Χρησιμοποιήστε έναν μετρητή pH για να μετρήσετε το pH, όχι το χαρτί pH ή άλλη ανακριβή τεχνική.
3. Προσθέστε απεσταγμένο νερό για να επιτύχετε τελικό όγκο 1 λίτρου.

Η αποστείρωση δεν είναι απαραίτητη για ορισμένες εφαρμογές, αλλά εάν το αποστειρώνετε, διανείμετε το διάλυμα σε κλάσματα και αυτόκλειστο για 20 λεπτά στα 15 psi (1,05 kg / cm²ή χρησιμοποιήστε αποστείρωση φίλτρου.

Ορός με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών μπορεί να είναι αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου. Μπορεί επίσης να καταψυχθεί, αλλά το διάλυμα 5Χ και 10Χ μπορεί καθίζηση όταν κρυώσει. Εάν πρέπει να ψύξετε ένα συμπυκνωμένο διάλυμα, αποθηκεύστε το πρώτα σε θερμοκρασία δωματίου έως ότου είστε βέβαιοι ότι τα άλατα έχουν διαλυθεί εντελώς. Εάν συμβεί καθίζηση, η θέρμανση της θερμοκρασίας θα τους επαναφέρει σε διάλυμα. Η διάρκεια ζωής του ψυκτικού διαλύματος είναι 1 μήνας.

Το 10X είναι ένα συμπυκνωμένο ή αποθεματικό διάλυμα, το οποίο μπορεί να αραιωθεί για να φτιάξει 1X ή κανονικό διάλυμα. Ένα διάλυμα 5Χ πρέπει να αραιωθεί 5 φορές για να γίνει μια φυσιολογική αραίωση, ενώ ένα διάλυμα 10Χ πρέπει να αραιωθεί 10 φορές.

Για να προετοιμάσετε ένα διάλυμα εργασίας 1 λίτρου 1X PBS από ένα διάλυμα 10Χ PBS, προσθέστε 100 ml του διαλύματος 10Χ σε 900 ml νερού. Αυτό αλλάζει μόνο τη συγκέντρωση του διαλύματος, όχι την γραμμομοριακή ή γραμμομοριακή ποσότητα των αντιδραστηρίων. Το pH δεν πρέπει να επηρεάζεται.

Μια άλλη δημοφιλής ρυθμιστική λύση είναι το αλατούχο διάλυμα Dulbecco με φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα ή το DPBS. Το DPBS, όπως το PBS, χρησιμοποιείται για βιολογική έρευνα και ρυθμιστικά διαλύματα στην περιοχή pH 7,2 έως 7,6. Μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου. Το διάλυμα του Dulbecco περιέχει χαμηλότερη συγκέντρωση φωσφορικών. Είναι 8,1 mM mM φωσφορικών ιόντων, ενώ το κανονικό PBS είναι 10 mM φωσφορικό. Η συνταγή για 1x DPBS είναι:

Διαλύστε τα άλατα σε 800 mL νερού. Ρυθμίστε το pH σε 7,2 έως 76 χρησιμοποιώντας υδροχλωρικό οξύ. Ρυθμίστε τον τελικό όγκο στα 1000 mL με νερό. Αυτόκλειστο στους 121 ° C για 20 λεπτά.

• Dulbecco, R.; et αϊ. (1954). "Σχηματισμός πλάκας και απομόνωση καθαρών γραμμών με ιούς πολιομυελίτιδας". Ι. Λήξη Med. 99 (2): 167–182.
• "Αλατούχο ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Εργαστήριο Τύπου Cold Spring Harbor.